Гемостаз представляет собой процесс остановки кровотечения в результате повреждения кровеносного сосуда. В системе гемостаза принято выделять три составляющих: вазоконстрикцию – сужение сосуда в месте повреждения, тромбоцитарный гемостаз – формирование тромбоцитами стабильного агрегата, перекрывающего кровопотерю, и плазменный гемостаз – каскад реакций между компонентами плазмы крови, направленный на превращение белка фибриногена в фибрин. Нарушения в работе системы гемостаза сопровождают многие патологические процессы. Они могут быть обусловлены как наследственными причинами, так и возникать при онкологических, кардиологических, неврологических, метаболических и иммунологических патологиях, а также сопровождать различные виды шока, терминальные состояния, хирургические вмешательства и обширные травмы. Нарушения в работе системы гемостаза характеризуются высокой потенциальной опасностью для пациента, поэтому при любых хирургических вмешательствах проводится обязательная диагностика состояния системы гемостаза.

Для оценки состояния системы гемостаза наряду с тестами на оценку плазменного звена проводятся тесты функциональности тромбоцитов. Они основаны на оценке способности тромбоцитов к формированию стабильного агрегата. Для выполнения данной функции на поверхности тромбоцитов присутствуют специфичные к агонистам рецепторы. Известно, что поверхность тромбоцитов имеет отрицательный заряд (в основном из-за присутствия сиаловой кислоты в некоторых 10 мембранных гликопротеинах), что является одним из механизмов, обуславливающих отсутствие контакта (тромбогенности) между неактивированными тромбоцитами и интактным отрицательно заряженным эндотелием. При активации тромбоцитов на их поверхности появляются отрицательно заряженные фосфолипиды (в первую очередь, фосфатидилсерин), которые перераспределяются наружу из внутреннего слоя плазматической мембраны и формируют субстрат для фиксации факторов свертывания и сборки прокоагулянтных комплексов.

Для определения заряда тромбоцитов мы предлагаем использовать метод флуоресцентной спектроскопии. А в качестве чувствительного к заряду мембраны зонда применить 1-анилинонафталин-8-сульфат (1,8-АНС). – гидрофобный зонд, имеющий отрицательный заряд. Известно, что квантовый выход флуоресценции1,8-АНС зависит от полярности его окружения и увеличивается в гидрофобных средах. В соответствии с литературными данными анионный зонд 1,8-АНС чувствителен к поверхностному заряду. Было показано, что нафталиновое кольцо молекулы 1,8-АНС может проникать в гидрофобную область мембраны и, тем самым становиться менее доступным для водной среды, что увеличивает квантовый выход флуоресценции зонда. При снижении заряда мембран, отрицательный зонд 1,8- АНС из-за сил отталкивания слабо взаимодействует с мембраной и квантовый выход флуоресценции снижается. Таким образом, снижении флуоресценции 1,8-АНС может указывать на экстернализацию фосфатидилсерина на внешнюю мембрану мембран тромбоцитов, снижение заряда тромбоцитов, что является сигналом для активации плазменного гемостаза и формирования тромба. Метод позволит не только оценить адгезивный потенциал тромбоцтов, но и их жизнеспособность, что немаловажно в диагностике различных тромбоцитопений, оценке качества тромбоцитарных масс, используемых при переливании крови или качества плазмы, богатой тромбоцитами (platelet-rich plasma, PRP), используемой при плазмолифтинге. Повреждения тромбоцитов будут изменять из мембранный потенциал в положительную сторону, что будет увеличивать связывание зонда с мембранами и, следовательно, интенсивность его флуоресценции.

На страницу проекта