В настоящее время среди методов лабораторной диагностики туберкулёза (ТБ) отсутствуют подходы для анализа гуморального иммунитета (антител), способные различать ТБ-больных, особенно в стадии латентной инфекции, и пациентов, привитых БЦЖ. Данная проблема наиболее актуальна для территорий с широким охватом вакцинации, таких как страны бывшего СССР. Для дифференциальной диагностики этих состояний целесообразно использовать белковые антигены, которые могут активировать разные клоны B-клеток и, соответственно, вызывать различный иммунный ответ против двух видов микроорганизмов – возбудителя ТБ Mycobacterium tuberculosis и вакцинного штамма M. bovis var. BCG. Два этих вида близки генетически, но отличаются набором порядка 250 дифференциально экспрессируемых генов, что значительно сужает набор белков-кандидатов, пригодных для тестирования. Одной из основных групп белков в этом наборе являются белки клеточной стенки.

Нами проводится фундаментальное исследование роли двух туберкулин-подобных белков микобактерий (белок Rv0431 M. tuberculosis и белок Mb0439 M. bovis var. BCG) в патогенезе туберкулёзной инфекции. Точная функция данных белков неизвестна, однако показано, что они ассоциированы с клеточной стенкой и, вероятно, участвуют в её формировании. Исследуемый нами белок Rv0431 регулирует иммунный ответ, позволяя избегать уничтожения патогена со стороны макрофагов и влияя на профиль цитокинов. Для белка Mb0439 исследования функции до сих пор не проводились. Мы занимаемся молекулярным клонированием рекомбинантных белков Rv0431 и Mb0439 методами генетической инженерии.

Предлагаемый проект является пилотным исследованием, позволяющим ответить на вопрос, может ли в популяции больных и вакцинированных БЦЖ людей формироваться дифференциальный иммунитет к различным белкам двух микроорганизмов? В дальнейшем, предполагается провести сравнение активности гуморального иммунитета и против других белков M. tuberculosis и M. bovis для выявления наиболее дискриминирующего набора. Полученные нами рекомбинантные белки планируется использовать для дифференциальной лабораторной диагностики туберкулёза в популяции БЦЖ-вакцинированных людей. В случае недостаточной биологической активности (отсутствия значимой разницы между гуморальным иммунитетом больных ТБ и вакцинированных БЦЖ) работа будет продолжена с другими парами гомологичных или негомологичных белков M. tuberculosis и M. bovis var. BCG.

Мы впервые на территории РФ получили очищенные препараты рекомбинантных туберкулин-подобных белков Rv0431 и Mb0439 для изучения их роли в патогенезе ТБ и использования в клинической лабораторной диагностике. Применение полученных нами рекомбинантных белков может позволить разделять группы ТБ-больных и вакцинированных БЦЖ на молекулярном уровне с помощью простых и доступных методик (сбор образцов крови и проведение иммуноферментного анализа). Создание подобной тест-системы сократит время диагностики ТБ, ограниченное длительным культивированием микроорганизма, позволит верифицировать случаи латентного течения инфекции, а также оценивать активность противотуберкулёзного иммунитета среди прослойки вакцинированного населения.

На страницу проекта