В работе создаётся генетическая конструкция для получения рекомбинантного белка IA-2 (тирозинфосфатазы) в клетках кишечной палочки. Этот белок важен для диагностики сахарного диабета 1 типа, так как служит аутоантигеном, на который реагируют антитела пациентов. Проблема в том, что IA-2 плохо растворяется при экспрессии в бактериях и образует нерастворимые агрегаты. Для решения этой проблемы использована фьюжн-стратегия: цитоплазматический домен IA-2 (остатки 771–979) слит с мальтозосвязывающим белком (MBP), который помогает белку правильно сворачиваться и оставаться в растворимой форме. Конструкция собрана на основе вектора pTXB1 системы IMPACT, позволяющей очистить белок на хитиновой колонке и отщепить его от интеина с помощью DTT, получив в итоге нативный белок без дополнительных меток. Работа включала клонирование генов MBP и IA-2, трансформацию в штаммы E. coli XL1-Blue и BL21(DE3), подбор условий экспрессии (0,2 мМ IPTG, 27 °C), очистку на хитиновой смоле и анализ фракций методом электрофореза в ПААГ. В результате удалось получить растворимый рекомбинантный IA-2, пригодный для дальнейшего использования в иммунодиагностике диабета.

На страницу проекта